纤维连接蛋白提取纯化工艺优化及其活性评价

针对牛血浆纤维连接蛋白，建立 “冷乙醇沉淀 - 亲和层析” 联合工艺：首先通过 5℃条件下 30% 乙醇沉淀去除杂蛋白，再利用肝素 - Sepharose 柱层析（洗脱梯度 0-1M NaCl）分离 FN。优化后得率达 8.2mg/L 血浆，纯度经 HPLC-SEC 测定为 98.7%，分子质量约 450kDa（与理论值一致）。活性检测显示，该提取物在 1μg/cm² 包被浓度下可使 HUVEC 细胞铺展面积增加 60%，且热稳定性优于市售标准品（60℃处理 30min 后活性保留率 85% vs 72%）。本工艺为高活性纤维连接蛋白原料制备提供了标准化方案。